绵羊附红细胞体（绵羊嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

绵羊附红细胞体（绵羊嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对绵羊附红细胞体高度保守序列设计，避免与其他病原体交叉反应。

即开即用：预混优化试剂，用户仅需提供DNA模板。

内置质控：提供阳性对照（非活体DNA片段），便于区分假阴性结果。

宽动态范围：定量检测线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

快速检测：结合荧光定量PCR技术，实现实时监测扩增进程。

适用范围：科研用途，适用于绵羊血液、组织等样本中附红细胞体DNA的定性与定量检测。

操作流程

样本制备

DNA提取：

血液样本：无菌采集EDTA抗凝全血2mL，使用兼容的核酸提取试剂盒提取DNA。

组织/病灶样本：取新鲜组织或渗出物，匀浆后提取DNA。

注意事项：避免交叉污染，建议在独立区域操作。

阳性对照稀释（示例：10²~10⁷拷贝/μL梯度制备）：

标记6管，依次加入45μL稀释液，梯度稀释阳性对照DNA（起始浓度10⁸拷贝/μL）。

每步稀释后涡旋混匀，冰上保存备用。

PCR反应体系配制

按20μL体系配制：加入预混试剂、引物探针混合液、模板DNA（或对照）。

建议设置阴性对照（无模板水）及阳性对照（稀释梯度）。

荧光定量PCR程序

预变性：95℃ 2分钟；

扩增循环：95℃ 15秒 → 60℃ 60秒（采集荧光），共40循环。

结果分析

基线设定：选择指数扩增前稳定信号区间（建议循环数6~15）。

阈值设定：高于阴性对照荧光信号最高点。

判读标准：

阳性：Ct值＜38，且呈现指数扩增曲线；

可疑：38≤Ct＜40，需复测确认；

阴性：Ct≥40或无扩增信号。

注意事项

防污染措施：

分设试剂配制区、样本处理区及扩增区，使用带滤芯枪头。

实验环境需无核酸气溶胶污染。

质控要求：

阴性对照应无扩增（Ct=40），阳性对照Ct≤35。

样本要求：

避免反复冻融DNA，建议分装保存；

送检样本需明确来源及保存条件（如液氮/Trizol）。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

假阳性风险：需排除环境或操作污染；假阴性可能源于样本降解或抑制剂存在。

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