兔附红细胞体（兔嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

兔附红细胞体（兔嗜血支原体）探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，专用于兔附红细胞体（Eperythrozoon lenps，又称兔嗜血支原体）核酸的定性与定量检测。其核心优势包括高特异性（针对保守基因序列设计引物和探针）、高灵敏度（检测限低至100–1000拷贝/反应）及防污染设计（闭管操作），适用于科研、养殖业疾病监测及临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qPCR预混液 | 500 μL | 含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品及样本稀释 |

| 引物-探针干粉 | 50T | 特异性扩增目标基因（如16S rRNA） |

| 阳性对照（质粒DNA） | 50 μL（1×10⁷拷贝/μL） | 用于标准曲线绘制及质控 |

| 阴性对照 | 50 μL | 无核酸酶水，排除污染干扰 |

| 使用说明书 | 1份 | 操作流程及数据分析方法 |

操作流程

1. 标准曲线制备（定量检测需6个梯度）

将阳性对照10倍梯度稀释（10⁶–10¹拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免交叉污染。

2. 样本DNA提取

推荐使用商品化DNA提取试剂盒，提取兔血液或组织样本DNA。设置阴性/阳性对照（N+2原则）。

3. PCR反应体系（20 μL）

预混液：10 μL

引物-探针混合液：2 μL

模板DNA：2 μL

补足无菌水至20 μL。

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 5分钟 | 1 |

| 扩增 | 95℃ | 15秒 | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 45秒（采集FAM荧光） |

适用仪器：ABI 7500、Bio-Rad CFX96等主流荧光定量PCR仪。

结果判读

定性检测：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct值≥40或无扩增。

灰区（35<Ct<40）：需复检确认。

定量检测：通过标准曲线计算样本拷贝数（R²≥0.99）。

注意事项

防污染措施：

严格分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区）。

使用带滤芯枪头及独立耗材。

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

局限性：

检测结果受样本质量、提取方法及病原体变异影响。

不适用于活体病原分离。

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