产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) 新品

产品介绍：

产肠毒素性大肠杆菌（ETEC）核酸检测试剂盒（荧光PCR法）是一种用于体外定性检测样本中产肠毒素性大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC）特异性毒力基因的分子诊断工具。该试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过扩增和检测病原体的毒力基因，来判断样本是否含有致病性的ETEC。

检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan探针法（部分产品可能使用MGB探针以提高对高AT含量基因的特异性）进行检测，其流程如下：

模板准备： 从待测样本（如粪便、食品或环境样本）中提取细菌DNA。

荧光PCR扩增： 这是核心检测环节。

反应体系中包含针对ETEC特异性毒力基因设计的引物和荧光标记的探针。ETEC的主要致病因子是肠毒素，因此检测靶标通常为不耐热肠毒素基因（lt）和耐热肠毒素基因（st）。

在PCR扩增过程中，如果样本中含有ETEC的DNA，TaqMan探针会与目标基因片段特异性结合，并在DNA聚合酶的作用下被水解，从而释放出荧光信号。

荧光定量PCR仪会实时监测反应管中的荧光信号。先进的试剂盒通常采用多重PCR技术，在一个反应管中同时检测lt基因和st基因（使用不同荧光通道，如FAM和VIC），并可能包含内参系统以监控反应过程。

结果判读： 根据Ct值（循环阈值）和扩增曲线的形态进行判定。通常，Ct值低于设定阈值（如Ct≤35-40）且呈现典型“S”型扩增曲线判为阳性，表明样本中检出ETEC核酸。

主要用途

该试剂盒主要用于以下几个方面：

临床疾病诊断： 辅助诊断由ETEC引起的腹泻，特别是旅游者腹泻和婴幼儿腹泻。ETEC感染可导致轻度水泻或严重的霍乱样症状。

食品安全检测： 用于检测食品（如生肉、蔬菜、即食食品）中是否存在ETEC污染，保障食品安全。

公共卫生监测： 用于疾控中心（CDC）对食源性疾病暴发事件进行溯源和流行病学调查，特别是在发展中国家，ETEC是腹泻病的重要病原体。

科研应用： 广泛应用于微生物学、流行病学及疫苗研发等相关领域的科研实验。

方法优势

相较于传统的细菌培养、动物试验或普通PCR检测，荧光PCR法具有显著优势：

高特异性： 直接检测毒力基因（lt和st），能够精准识别具有致病能力的菌株，有效区分非致病性大肠杆菌，避免假阳性。

高灵敏度： 检测灵敏度极高（部分产品可达到每反应1个DNA拷贝或10³ CFU/mL），有助于在细菌含量较低时做出准确判断。

快速高效： 整个检测过程通常在2小时内完成，远快于传统培养法（通常需要数天），适合对大量样本进行快速筛查。

高通量与多重检测： 可在一个反应体系中同时检测多种毒素基因，提高了检测效率和准确性。

核心优势与技术要点：

高特异性

引物设计基于目标基因保守区域，可区分高度同源序列（如病毒变异株）。

高灵敏度

检测限低至10拷贝/反应，适用于微量样本。

高效扩增

热启动酶（如HotStarTaq）减少非特异性扩增，30分钟内完成40个循环。

防污染设计

UNG酶系统降解残留产物，避免交叉污染。

稳定性提升

冻干预混技术实现常温运输，操作便捷。

公司正在出售的产品：

防污染操作

需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作，使用带滤芯吸头及专用实验服。

阳性对照管理

浓度高达1×10⁸拷贝/μL，需单独存放并避免污染其他试剂。

局限性

仅限科研使用，不可用于临床诊断；

环境样本中可能存在PCR抑制剂，需设置内参对照。