独活探针法PCR鉴定试剂盒

独活探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过检测荧光信号增长（FAM通道）实时监测扩增产物，结合标准曲线计算起始模板浓度。

产品特点

高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10¹拷贝/μL。

高特异性：针对独活保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需加入模板RNA。

双模式检测：支持定性与定量分析（线性范围10¹–10⁷拷贝/μL）。

质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照。

试剂盒组分

| 成分 | 规格 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10¹–10⁶拷贝/μL）

使用阳性对照逐级稀释（每次稀释换枪头），冰上保存。

2. RNA提取

建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），兼容常规RNA提取试剂盒。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/标准品/水 | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光）

数据分析

定量：以log（标准品浓度）为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性：

阳性：Ct ≤ 36，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40。

可疑（36<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30或≤36。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及器材。

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