番泻叶探针法PCR鉴定试剂盒

番泻叶探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

特异性扩增：引物针对番泻叶高度保守序列设计，扩增片段长度560 bp，避免与其他物种交叉反应。

定量分析：通过标准曲线（10²~10⁷拷贝/μL）实现模板绝对定量，灵敏度达10~100拷贝。

产品组成

| 成分 | 规格/体积 | 功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq DNA聚合酶 |

| 引物混合液 | 100 μL | 优化后的特异性引物 |

| TaqMan探针 | 50 μL | 荧光标记探针 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 验证实验有效性 |

| 模板稀释液 | 1 mL | 标准曲线稀释用 |

操作步骤

标准曲线制备：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每个梯度单独分装，避免污染。

RNA提取：

使用柱式法或试剂盒提取样品RNA，建议设置阴性对照（水）和阳性对照（试剂盒提供）。

qPCR反应体系（20 μL）：

加入10 μL缓冲液、2 μL酶混合液、1 μL探针、2 μL引物、5 μL模板RNA。

扩增程序：

逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 循环（40次）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光）。

性能参数

特异性：不与常见植物病原体或近缘种交叉反应。

灵敏度：最低检测限10拷贝/μL。

重复性：CV值＜5%。

适用样本：干燥叶片、粉末或提取物中的番泻叶基因组DNA/RNA。

注意事项

防污染措施：

分装试剂，避免反复冻融；操作区与扩增区物理隔离。

质量控制：

阴性对照应无扩增曲线，阳性对照Ct值≤30。

应用限制：

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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