防风探针法PCR鉴定试剂盒 新品

防风探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的实时变化（Ct值），计算起始模板浓度。

产品特点

高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10拷贝/μL。

高特异性：靶向防风保守序列，无交叉反应。

即开即用：预混缓冲液与酶体系，简化操作流程。

内控设计：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，确保结果可靠性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 反应体系基础液 |

| 酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq酶 |

| 荧光PCR稀释液 | 1 mL | 标准曲线制备 |

| 引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增防风序列 |

| 探针 | 50 μL | 荧光信号生成 |

| 阳性对照 | 50 μL | 1×10^8拷贝/μL |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7–10^2拷贝/μL），用于定量分析。

2. RNA提取

自备样品RNA，推荐使用柱式提取法，并设置制备对照（PC/NC）。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

按比例加入缓冲液、酶、引物、探针及模板RNA，程序如下：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性：Ct≤36为阳性，≥40为阴性，36–40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照。

探针避光：防止荧光淬灭。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及器材。

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