粉萆薢探针法PCR鉴定试剂盒

粉萆薢探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法实时荧光定量PCR技术（qPCR），专用于粉萆薢（Rhizoma dioscoreae hypoglaucae）的快速、高特异性鉴定。通过靶向粉萆薢保守基因序列的引物和探针，结合荧光信号检测，实现样本的定性与定量分析。适用于科研用途，不可用于临床诊断。

检测原理

探针法qPCR：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

当Taq酶在扩增中切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号，信号强度与扩增产物量成正比。

三步反应流程：

逆转录（若检测RNA）：将RNA模板反转录为cDNA。

扩增：通过40个循环的变性（94℃）、退火（60℃）、延伸（60℃）扩增目标序列。

检测：实时采集荧光信号，通过Ct值定量或定性分析。

产品组分

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| qPCR酶混合液 | 100 μL | 含Taq酶、逆转录酶（若适用） |

| 荧光PCR稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照 |

| 粉萆薢引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增目标序列 |

| 粉萆薢探针 | 50 μL | 荧光信号标记 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 标准曲线制备及质控 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量分析）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

标记6管，依次加入稀释液，涡旋混匀后冰上保存。

2. 样本处理

RNA提取：使用兼容的RNA提取试剂盒制备模板，建议设置阴/阳性对照。

反应体系配置（20 μL）：

10 μL qPCR缓冲液

2 μL酶混合液

1 μL探针

2 μL引物混合液

5 μL模板（样本/标准品/阴性对照）

3. qPCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min | 40 |

4. 数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性：

阳性：Ct≤35，扩增曲线典型；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

试剂使用前需完全解冻并混匀，避免反复冻融。

仅限科研使用，不可用于临床诊断或治疗。

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