梅花探针法PCR鉴定试剂盒

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光PCR技术，专用于梅花核酸的体外定性及定量检测，适用于科研领域（如植物病原体研究），不适用于临床诊断。

检验原理

通过设计梅花基因保守区的特异性引物及探针，在PCR扩增过程中释放荧光信号，利用荧光定量PCR仪实时监测信号强度，实现高灵敏度检测（灵敏度达10³拷贝/μL）。

试剂组成

| 组分 | 规格 | 功能描述 |

| 梅花扩增液 | 25μL×1管 | 含引物、探针及反应缓冲液 |

| 梅花反应液 | 975μL×1管 | 主反应混合液 |

| 阳性质控品 | 50μL×1管 | 人工合成DNA片段（10⁸拷贝/μL） |

| 阴性质控品 | 50μL×1管 | 无核酸酶水 |

操作步骤

1. 样品制备

样本类型：植物组织、培养物等。

DNA提取：推荐使用商品化病毒DNA提取试剂盒，避免交叉污染。

2. 试剂配制（20μL体系）

| 组分 | 体积 |

| 梅花反应液 | 19.5μL |

| 梅花扩增液 | 0.5μL |

| 模板DNA/质控品 | 5μL |

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 荧光采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 否 |

| | 55℃ | 30 sec | | 是 |

4. 结果判读

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈指数增长。

可疑：Ct值35-38，需重复检测。

阴性：无Ct值或曲线平缓。

质控标准

阳性质控品：Ct值≤30，扩增曲线明显。

阴性质控品：无扩增信号。

无效实验：质控未达标需重新检测。

注意事项

实验室要求：分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

试剂处理：使用滤芯吸头，所有离心管/耗材需无核酸酶污染。

样本保存：短期-20℃，长期-70℃（避免反复冻融）。

适用仪器：ABI系列、Bio-Rad、LightCycler等荧光定量PCR仪。

性能参数

特异性：仅扩增梅花靶标，无交叉反应。

灵敏度：最低检测限1.0×10³拷贝/mL。

精密度：批内/批间变异系数≤5%。

公司正在出售的产品