南沙参探针法PCR鉴定试剂盒

产品原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过荧光强度变化定量分析目标序列。

检测流程：包括反转录（RNA→cDNA）、PCR扩增、实时荧光检测三步骤。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对南沙参高度保守区设计，避免交叉反应。

即开即用：仅需提供样品RNA模板，预混缓冲液、酶、引物及探针。

双用途：支持定性和定量检测（线性范围：10E1~10E7拷贝/μL）。

质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照，排除假阴性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |

| 南沙参qRT-PCR引物混合液 | 100μL |

| 南沙参qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10E8拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

标准曲线制备（6个梯度稀释）

标记离心管（6~1号），每管加45μL稀释液。

依次稀释阳性对照（10倍梯度，10E7~10E2拷贝/μL），冰上保存。

RNA提取

建议设置N+2样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的RNA提取试剂盒。

qRT-PCR反应（20μL体系）

按比例加入缓冲液、酶、探针、引物及模板（样品/标准品/对照）。

反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35或≤36。

灰区（35~40或36~40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

防污染措施：使用带芯枪头、一次性手套，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，反应液避光保存，避免气泡。

声明

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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