牛蒡子探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品特点

高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列。

特异性强：引物及探针基于牛蒡子保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶混合液及引物探针，用户仅需提供DNA模板。

防污染设计：一管式闭管检测，减少气溶胶污染风险。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| 酶混合液 | 100μL | 含Taq DNA聚合酶及逆转录酶 |

| 荧光PCR探针 | 50μL | 5'端FAM标记，3'端淬灭基团 |

| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增牛蒡子靶序列 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |

| 模板稀释液 | 1mL | 用于阳性对照梯度稀释 |

实验操作流程

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

标记离心管（7至2号），每管加45μL模板稀释液。

从7号管（初始浓度1×10^8拷贝/μL）开始，依次10倍稀释至2号管（1×10^3拷贝/μL），震荡混匀后冰浴备用。

2. 样品DNA提取

建议设置阴性对照（NC，纯水）和阳性对照（PC，稀释后的阳性标准品）。

使用兼容的DNA提取试剂纯化样本，避免RNA酶污染。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30分钟（若含RNA步骤）。

预变性：94℃ 10分钟。

扩增循环（40次）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM荧光信号）。

质控标准

阴性对照：无扩增曲线或Ct值≥40。

阳性对照：Ct值≤32，扩增曲线呈典型指数期。

标准曲线：R²≥0.98，扩增效率90%~110%。

注意事项

实验分区操作（试剂配制、样本处理、扩增区分离）。

使用无核酸酶耗材（带滤芯枪头、灭菌离心管）。

避免反复冻融试剂，分装后使用。

探针避光保存，防止荧光淬灭。

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