覆盆子探针法PCR鉴定试剂盒

覆盆子探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光PCR技术，用于覆盆子核酸的特异性检测，适用于科研用途，如物种鉴定或病原体辅助诊断（如牛白血病病毒检测）。不适用于临床诊断。

检验原理

技术核心：针对覆盆子基因保守区域设计特异性引物及荧光探针，通过实时监测PCR扩增过程中的荧光信号（FAM通道），实现定性/定量分析。

灵敏度：可检测低至10 ng的DNA模板，特异性＞99%（与测序法比对）。

试剂组成

| 组分 | 规格（示例） | 备注 |

| 覆盆子扩增液 | 25 μL/管 | 含引物、探针 |

| 反应液 | 975 μL/管 | 预混PCR Master Mix |

| 阳性质控品 | 50 μL/管 | 人工合成DNA片段 |

| 阴性质控品 | 50 μL/管 | 无核酸酶水 |

操作步骤

样本处理：

采集组织、血液或拭子样本，建议使用商品化DNA提取试剂盒（如Hypure病毒基因组提取试剂盒）。

反应体系配制（以25 μL体系为例）：

反应液19.5 μL + 扩增液0.5 μL + 模板DNA 5 μL。

PCR扩增程序：

预变性：95℃ 3 min；

40循环：95℃ 15 sec → 55℃ 30 sec（采集荧光信号）。

仪器兼容性：ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪。

结果判读

| 结果类型 | Ct值范围 | 判定标准 |

| 阳性 | ≤35 | 明显指数扩增曲线 |

| 可疑 | 35＜Ct＜38 | 建议复测，复核后Ct＜40则判为阳性 |

| 阴性 | ≥40或无Ct值 | 无扩增曲线 |

质控要求：

阴性质控品：Ct=40或无信号；

阳性质控品：Ct≤35且曲线呈指数增长。

注意事项

避免交叉污染，分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。

反复冻融≤7次，分装保存以延长试剂寿命。

可疑样本需复测确认，建议使用新鲜提取的核酸模板。

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