高良姜探针法PCR鉴定试剂盒

高良姜探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法实时荧光定量PCR技术，专用于高良姜（Rhizoma alpiniae officinarum）的特异性鉴定。通过靶向高良姜保守基因序列设计引物和探针，实现高灵敏度、高特异性的核酸扩增与检测，适用于科研领域中的物种鉴定及质量控制。

检测原理

探针法设计：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

荧光强度与扩增产物量成正比，实现实时定量分析。

技术优势：

特异性强：引物及探针针对高良姜高度保守序列设计，避免交叉反应。

灵敏度高：最低检测限可达3-10拷贝/反应。

快速便捷：全程2-4小时完成，无需电泳检测。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/数量 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL |

| Taq酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100 μL |

| 探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

| 阴性对照 | 1管 |

实验步骤

1. 样本处理

DNA提取：

液体样本：离心后弃上清，加入50 μL DNA裂解液，100℃裂解10分钟，离心取上清。

固体样本：研磨后同法处理。

阳性对照稀释：按10倍梯度稀释至10^2-10^7拷贝/μL，用于标准曲线绘制。

2. PCR反应体系（20 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板DNA | 5 |

3. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（可选） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增循环（40次） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光信号） |

结果分析

定量检测：以标准曲线Ct值计算样本拷贝数。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，且扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增曲线。

可疑：35 < Ct < 40，需重复检测。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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