狗脊探针法PCR鉴定试剂盒

狗脊探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术（qPCR），专用于狗脊（Rhizoma cibotii）的快速、高特异性鉴定。通过靶向保守基因序列设计引物与探针，实现对样本中狗脊成分的定性与定量分析，适用于科研领域（不可用于临床诊断）。

技术原理

探针法qPCR：

探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。

通过标准曲线计算模板初始浓度，灵敏度可达10³拷贝/反应。

检测流程：

反转录（若检测RNA）：将RNA逆转录为cDNA。

扩增与检测：40个循环的变性（94℃）、退火/延伸（60℃），采集FAM通道荧光信号。

产品组成

| 成分 | 规格 | 保存条件 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL | -20℃ |

| 酶混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 引物混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 狗脊特异性探针 | 50 μL | -20℃ |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |

| 模板稀释液 | 1 mL | 室温 |

样本要求

样本类型：组织、细胞、血液、细菌等（需避免反复冻融）。

RNA/DNA提取：建议使用柱式提取法，避免抑制剂残留。

保存条件：液氮、-80℃或Trizol中保存（RNA样本需防降解）。

实验步骤

标准曲线制备：

将阳性对照10倍梯度稀释（10²–10⁷拷贝/μL），每个浓度设复孔。

反应体系（20 μL）：

| 组分 | 体积 |

| qPCR缓冲液 | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| 探针 | 1 μL |

| 模板（样本/标准品） | 5 μL |

扩增程序：

50℃ 30 min（反转录）；94℃ 10 min（预变性）；40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min）。

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。

可疑：35 < Ct < 40，需复测。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

注意事项

分区操作：试剂配制、样本处理、PCR扩增需在独立区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

探针保护：避光保存，避免反复冻融。

适用范围：仅限科研使用，临床诊断需经额外验证。

储存与运输

储存：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输：低温干冰或冰袋运输。

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