佩兰探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒采用探针法实时荧光定量PCR（qPCR）技术，专用于佩兰（Herba eupatorii）的特异性鉴定。通过设计保守区引物及荧光探针，实现对目标DNA的高灵敏度、高特异性扩增检测，适用于科研领域的物种鉴定、基因表达分析等。

实验原理

探针法qPCR：在PCR体系中加入荧光标记探针，探针与目标DNA结合后释放荧光信号，通过实时监测荧光强度定量分析模板浓度。

三步扩增：

变性：94℃使DNA双链解离为单链。

退火：55℃下引物与模板特异性结合。

延伸：72℃时Taq酶沿模板合成新链，探针水解释放荧光信号。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 用途说明 |

| PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） | 含dNTPs、Taq酶、缓冲液等 |

| 引物混合液 | 100 μL（白盖）| 特异性引物及探针 |

| 阳性对照（1×10⁸/μL）| 50 μL（黄盖）| 验证实验有效性 |

| 超纯水 | 1 mL | 阴性对照及稀释模板 |

操作步骤

1. 样本制备

DNA提取：使用兼容的核酸提取试剂（如柱式病毒DNAout），制备待测样本DNA（建议浓度≥10 ng/μL）。

对照设置：需包括阳性对照（试剂盒提供）和阴性对照（超纯水）。

2. PCR反应体系（40 μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR MagicMix 3.0 | 20 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 18 |

循环条件：

预变性：95℃ 5 min

35循环：95℃ 30 sec → 55℃ 30 sec → 72℃ 40 sec（荧光采集）

终延伸：72℃ 7 min

3. 结果分析

阳性判定：扩增曲线呈“S”形且Ct值≤35。

阴性对照：无扩增曲线。

电泳验证：阳性对照需出现551 bp条带（可选）。

注意事项

样本要求：避免使用降解DNA或RNA样本，推荐保存于液氮、Trizol或-80℃。

污染防控：阳性对照单独存放，操作分区（样本制备/PCR/产物分析）。

重复实验：若样本无扩增，可稀释10倍后复测以排除抑制剂干扰。

技术参数

特异性：仅扩增佩兰目标序列，无交叉反应。

灵敏度：检测下限≤10 copies/μL。

应用范围：科研用途（非临床诊断）。

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