枇杷叶探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法特异性检测枇杷叶（Eriobotrya japonica）的核酸序列。适用于科研领域中对枇杷叶成分的定性及定量分析，具有高灵敏度、高特异性和操作便捷等特点。

产品组成

探针法qRT-PCR缓冲液（500 μL）

探针法qRT-PCR酶混合液（100 μL，含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl₂等）

荧光PCR专用模板稀释液（1 mL）

枇杷叶特异性引物混合液（100 μL）

枇杷叶qRT-PCR探针（50 μL，5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团）

阳性对照（50 μL，1×10⁸拷贝/μL，无传染性DNA片段）

说明书（1份）

技术参数

检测原理：探针法通过Taq酶的5'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。

灵敏度：可检测低至3个拷贝的靶序列。

特异性：引物及探针针对枇杷叶高度保守区设计，避免交叉反应。

扩增效率：标准曲线R²≥0.99，扩增斜率3.3~3.8。

适用样本：粗提DNA/RNA、组织、细胞等（需自备提取试剂）。

操作流程

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于定量分析。

2. 反应体系配置（20 μL/管）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

| 超纯水 | 补足至20 |

3. PCR程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃→60℃ | 15 sec→1 min（采集荧光） |

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本拷贝数。

定性分析：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型。

可疑：Ct值35~40，需复测。

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

注意事项

样本处理：避免反复冻融，建议使用液氮或Trizol保存。

防污染：分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

质量控制：每批次实验需包含阴性对照（超纯水）和阳性对照。

适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

储存与运输

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

运输方式：低温干冰运输。

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