骨碎补探针法PCR鉴定试剂盒

骨碎补探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性探针与目标DNA序列结合，通过荧光信号实时监测扩增过程，实现对骨碎补（Drynaria fortunei槲蕨）DNA的定性与定量检测。

产品特点

高特异性：引物及探针针对骨碎补保守基因序列设计，经生物信息学验证，避免交叉反应。

高灵敏度：最低检测限可达10³拷贝/μL，无需预增菌。

稳定性：经标准菌株及临床样本验证，重现性良好。

适用范围：适用于组织、细胞、中药材等样本的DNA检测。

灵活性：支持科研用途的定做服务（如抗药性基因、转基因元件检测）。

实验步骤

1. 样本制备

样本类型：组织、细胞或中药材提取的DNA。

提取方法：推荐使用柱式DNA提取试剂盒或免提取核酸释放剂。

阴性/阳性对照：

阴性对照：无菌水。

阳性对照：试剂盒提供的标准DNA片段（需梯度稀释）。

2. 标准曲线制备（定量分析）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁶~10¹拷贝/μL），每个浓度设3个复孔。

反应体系（20μL）：

模板DNA 2μL

预混PCR Master Mix 10μL

引物/探针混合液 2μL

无核酸酶水 6μL

3. qPCR反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15s | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30s | 40 |

荧光信号采集于退火/延伸阶段完成。

4. 数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

Ct≤36：阳性；Ct≥40：阴性；36<Ct<40需复测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

试剂解冻后需涡旋混匀并短暂离心。

探针避光保存，反应体系避免气泡。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

废弃物的处理：实验台用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

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