瓜蒌皮探针法PCR鉴定试剂盒 新品

瓜蒌皮探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品用途

专用于瓜蒌皮（Pericarpium trichosanthis）的定性或定量PCR鉴定，仅限科研使用。

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放报告基团荧光信号。

实时检测：通过监测荧光信号增长（FAM通道），实现对靶标序列的定量（Ct值）或定性分析。

高特异性：引物及探针针对瓜蒌皮保守序列设计，避免交叉反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 瓜蒌皮探针法引物混合液 | 100μL |

| 瓜蒌皮qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释，10²~10⁷拷贝/μL）：

使用阳性对照按10倍梯度稀释，避免交叉污染。

2. RNA提取：

自备样品RNA，推荐使用柱式提取法，确保无DNase污染。

3. qPCR反应体系（20μL）：

| 组分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/标准品 | 5 |

4. 反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光）

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型。

可疑（35<Ct<40）：需复测。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阳性对照需最后加入，防止污染其他组分。

本试剂盒不适用于临床诊断。

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