广防己探针法PCR鉴定试剂盒 新品

广防己探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于广防己（Radix aristolochiae fangchi）的特异性核酸鉴定，适用于科研领域（不可用于临床）。通过优化设计的引物与探针，结合Taq酶的5'核酸外切酶活性，实现高灵敏度和高特异性的检测，可同时完成定性与定量分析。

检测原理

探针法基于实时荧光定量PCR技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶切割探针释放荧光信号。

信号检测：通过监测扩增过程中荧光强度的增长，实现对起始模板的定量（Ct值）与定性分析。

产品特点

高灵敏度：检测限低至1×10^2拷贝/μL。

高特异性：引物针对广防己保守序列设计，避免交叉反应。

便捷性：即开即用，兼容常规RNA/DNA提取方法。

质控完善：含阳性对照（无传染性DNA片段）及阴性对照。

试剂盒组分

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qPCR酶混合液 | 50-100μL | 含逆转录酶及Taq酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 标准品稀释及阴性对照 |

| 引物-探针混合液 | 100μL | 特异性扩增靶序列 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

2. 样本处理

提取待测样本RNA/DNA，建议设置阴性（NC）和阳性对照（PC）。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物-探针混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板DNA/RNA | 5 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

|------|------|------|

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

结果分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。

可疑：35<Ct<40，需复测确认。

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，试剂避免反复冻融。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

实验废弃物需按生物安全规范处置。

免责声明

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或其他非科研用途。

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