广藿香探针法PCR鉴定试剂盒

广藿香探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于广藿香（Pogostemon cablin）的快速、高特异性核酸鉴定。适用于科研领域，可实现对广藿香RNA的定性或定量分析，具有高灵敏度和低交叉反应性。

技术原理

采用实时荧光定量PCR技术，通过5'核酸外切酶活性的Taq酶切割探针，释放荧光信号（FAM通道）。探针与广藿香高度保守序列特异性结合，避免与其他RNA交叉反应。

试剂盒组成

探针法qRT-PCR缓冲液（500μL）

酶混合液（100μL，含逆转录酶及Taq酶）

荧光PCR模板稀释液（1mL）

广藿香特异性引物及探针混合液（100μL）

阳性对照（1×10^8拷贝/μL，50μL）

说明书（1份）

实验步骤

标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

标记离心管（7~2号），依次加入稀释液与阳性对照，涡旋混匀。

样本RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒，建议设置阴性对照（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。

PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样本RNA | 5 | - | - |

| 超纯水 | - | 5 | - |

| 标准曲线稀释液 | - | - | 5（对应梯度） |

扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（荧光采集） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30且扩增曲线典型。

样本Ct≤35为阳性；≥40为阴性；35~40需复测。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作需在无菌环境下进行，避免RNA降解。

不同批次试剂避免混用。

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