桂枝探针法PCR鉴定试剂盒

桂枝探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于桂枝（Ramulus cinnamomi）的快速鉴定，适用于科研领域中的物种鉴别、掺假检测及定量分析。核心原理为TaqMan探针技术，通过5'核酸外切酶活性切割荧光标记探针，实时监测扩增荧光信号，兼具高灵敏度和特异性。

产品组分

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50–100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 桂枝特异性引物-探针干粉 | 50–100 T |

| 试剂五 | PCR阳性对照（1×10⁷–10⁸拷贝/μL） | 50 μL |

技术参数

检测范围：定性或定量（线性范围≥5个数量级）。

灵敏度：最低检测限100–1000拷贝/反应。

特异性：针对桂枝保守基因区域（如ITS或叶绿体基因），无交叉反应。

适用样本：药材DNA提取物（纯度要求OD₂₆₀/₂₈₀=1.8–2.0）。

操作流程

标准曲线制备（定量分析需6个梯度稀释，10⁷–10²拷贝/μL）。

样本DNA提取：建议设置阴性/阳性对照（N+2样本）。

PCR反应体系（20 μL）：

预混液：缓冲液10 μL + 酶混合液2 μL + 引物探针混合液3 μL。

模板：5 μL DNA或对照品。

扩增程序：

逆转录（若需）：50℃ 30 min。

预变性：94℃ 10 min。

40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35且扩增曲线呈S型。

阴性：Ct＞40或无信号。

灰区（35<Ct≤40）：需复测。

注意事项

防污染：严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带芯枪头及专用工作服。

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤3次），有效期12个月。

质控要求：

阳性对照Ct≤32，阴性对照无扩增。

若质控失败，需排查污染或试剂失效。

局限性

假阳性风险：交叉污染或阳性对照泄漏。

假阴性可能：样本含PCR抑制物或提取效率低。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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