茜草探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光信号的增长（Ct值），实现对茜草RNA的定性和定量检测。

产品特点

高灵敏度：优化的引物和探针可检测低拷贝模板（灵敏度达10^1拷贝/μL）。

高特异性：针对茜草保守序列设计，无交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供RNA模板。

质量控制：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，避免假阴性。

适用范围：科研用途（不适用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL（含逆转录酶、Taq酶） |

| 荧光PCR稀释液 | 1 mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 茜草特异性探针 | 50μL |

| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） |

| 使用说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（6管），依次稀释阳性对照至10^6~10^1拷贝/μL，冰上保存。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒制备样本RNA，建议设置阴性/阳性提取对照。

3. qRT-PCR反应（20μL体系）

| 组分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| 缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| RNA模板 | 5 | - | - |

| 超纯水 | - | 5 | - |

| 标准曲线稀释液 | - | - | 5（对应梯度） |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

PCR循环（40×）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct ≥ 40。

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

耗材要求：使用带滤芯枪头及无菌离心管。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

废物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

公司正在出售的产品