千年健探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期12个月。

运输条件：低温避光运输。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度增长（Ct值）实现靶标核酸的定性与定量检测。

高特异性：引物及探针针对千年健保守序列设计，避免交叉反应。

试剂盒组分

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系 |

| qPCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |

| 引物混合液 | 100μL | 靶标特异性扩增 |

| 荧光探针 | 50μL | 信号检测 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

实验步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），分装至标记离心管，冰上保存。

2. 样本RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒（如柱式法），设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 样本RNA | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每次实验需包含阴性对照（无模板）和阳性对照。

探针避光：荧光探针需避光保存，避免信号衰减。

重复实验：灰区结果需重复检测，确保准确性。

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