芡实探针法PCR鉴定试剂盒

产品特点

高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列，适用于微量样本分析。

特异性强：基于芡实保守序列设计的引物及探针，避免与其他物种交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及对照，用户仅需提供DNA模板。

防污染设计：一管式闭管检测，减少气溶胶污染风险。

适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/含量 | 功能说明 |

| qPCR缓冲液 | 500μL | 含Mg²⁺、dNTPs等反应组分 |

| Taq酶混合液 | 100μL | 含热启动DNA聚合酶 |

| 荧光探针 | 50μL | 5'端FAM标记，3'端淬灭 |

| 引物混合液 | 100μL | 特异性扩增芡实靶序列 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |

| 模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |

实验步骤

标准曲线制备：

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

样本DNA提取：

建议设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，稀释后的标准品）。

qPCR反应体系（20μL）：

依次加入10μL缓冲液、2μL酶混合液、1μL探针、2μL引物、5μL模板DNA。

反应程序：

逆转录（50℃, 30min）→ 预变性（94℃, 10min）→ 40循环扩增（94℃ 15s, 60℃ 60s）。

质控标准

阴性对照：无扩增曲线或Ct值≥40。

阳性对照：Ct值≤32，扩增曲线呈典型指数期。

无效实验判定：若阳性质控未达标或阴性对照出现扩增，需重复实验。

注意事项

操作需在无核酸污染环境中进行，建议使用专用PCR实验室及一次性耗材。

试剂解冻后需充分混匀，分装避免反复冻融。

探针避光保存，防止荧光淬灭。

不同仪器需优化退火温度（建议范围55~65℃）。

常见问题

无扩增信号：检查模板完整性或试剂活性，重新提取DNA。

非特异性峰：优化退火温度或引物浓度。

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