羌活探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒采用探针法荧光定量PCR技术，专用于羌活（Rhizoma et radix notopterygii）的定性与定量鉴定。通过特异性引物和探针设计，可高效检测样品中的目标DNA片段，适用于科研用途，不适用于临床诊断。

产品组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500 μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100 μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | PCR引物-探针干粉/混合液 | 50次反应 |

| 试剂五 | PCR阳性对照（10^7-10^8拷贝/μL） | 50 μL |

| 说明书 | 操作手册 | 1份 |

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

技术原理

基于TaqMan探针技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ）。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，释放荧光信号。

实时定量：通过监测荧光强度变化，计算Ct值，实现模板定量分析。

操作步骤

标准曲线制备

用阳性对照（10^7-10^8拷贝/μL）进行10倍梯度稀释（10^1-10^6拷贝/μL）。

标记离心管（1-6号），每管加入45 μL稀释液，依次加入5 μL上一浓度标准品，涡旋混匀。

样品DNA提取

建议设置阴性对照（NC，水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。

使用兼容的DNA提取试剂盒纯化样品，避免交叉污染。

PCR反应体系（20 μL/反应）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液（试剂一） | 10 |

| 酶混合液（试剂二） | 2 |

| 引物-探针（试剂四） | 2-3 |

| 样品DNA/标准品 | 5 |

PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 预变性 | 95℃ | 10 min |

| 40个循环 | 95℃ | 15 sec |

| 退火/延伸/采集 | 60℃ | 60 sec |

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct ≥ 40或无扩增。

可疑结果（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样品处理、试剂配制、PCR扩增需在不同区域进行。

污染控制：使用带滤芯枪头，定期清洁工作台（10%次氯酸或75%乙醇）。

运输保存：-20℃避光运输，避免反复冻融。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

交叉污染可能导致假阳性；

仅限科研使用。

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