秦艽探针法PCR鉴定试剂盒

产品特点

高灵敏度与特异性：采用优化探针及引物，仅特异性扩增秦艽DNA，与其他物种无交叉反应，检测限低至单拷贝级别。

即开即用：预混含荧光探针的2×qPCR MasterMix（含Taq酶、dNTPs、缓冲液等），用户仅需加入模板DNA和引物。

双重检测模式：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

内控设计：提供无传染性阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，有效区分假阴性。

防污染设计：含UNG酶（可选）预防残留污染，探针法较染料法信噪比更高。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 | 用途说明 |

| 2×Probe qPCR MasterMix | 1 mL（红盖） | 含探针、酶及缓冲液 |

| 秦艽特异性引物探针混合液 | 100 μL（白盖） | 目标基因特异性检测 |

| 阳性对照（非活体DNA） | 50 μL（黄盖） | 1×10^8拷贝/μL |

| 超纯水 | 1 mL（亮黄色） | 反应体系稀释 |

| 核酸释放剂（试用装） | 1 mL（绿盖） | 快速样本前处理 |

| 使用手册 | 1份 | 操作流程及数据分析 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量分析）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），每稀释步骤更换枪头，冰上操作。

2. 样本DNA提取

推荐使用柱式提取法或试剂盒配套核酸释放剂，设置阴性（水）和阳性对照（10^3稀释液）。

3. qPCR反应体系（20μL）

按下表配制（示例为单次重复）：

| 组分 | 体积（μL） |

| 2×Probe MasterMix | 10 |

| 引物探针混合液 | 0.8 |

| 模板DNA | 2 |

| 超纯水 | 7.2 |

程序设置：95℃ 3min →（95℃ 15s → 60℃ 1min）×40循环，荧光采集于60℃阶段。

数据分析

定量：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤36且呈S型扩增曲线；样本Ct≤36判为阳性。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域完成，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需涡旋混匀并短暂离心，避光保存。

探针避光保存，反应管避免强光直射。

废弃处理：实验台及耗材需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

声明：本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。具体操作细节以实际到货说明书为准。

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