青果探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光强度的实时变化，计算Ct值，实现对青果RNA/DNA的定性与定量检测。

产品特点

高灵敏度：可检测低至几百拷贝/反应的靶序列。

高特异性：引物及探针针对青果保守区域设计，避免交叉反应。

便捷性：预混试剂即开即用，仅需提供样品RNA/DNA模板。

质控保障：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，确保结果可靠性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/含量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 青果引物混合液 | 100μL |

| 青果探针 | 50μL |

| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10^2~10^7拷贝/μL梯度稀释）

使用专用稀释液按10倍梯度稀释阳性对照，分装后冰上保存。

2. 样品制备

RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2原则）。

DNA提取：兼容常规提取方法，避免交叉污染。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管（μL） | 阴性对照（μL） | 标准曲线管（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |

| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 探针 | 1 | 1 | 1 |

| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |

| 样品RNA/DNA | 5 | - | - |

| 标准曲线稀释液 | - | - | 5 |

| 超纯水 | - | 5 | - |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录（仅RNA） | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

防污染：实验分区操作（试剂准备区、样品处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。

试剂保存：避免反复冻融，解冻后需充分混匀并离心。

质控要求：

阴性对照：Ct≥40或无扩增。

阳性对照：Ct≤30且曲线典型。

禁用范围：本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断。

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