海金沙探针法PCR鉴定试剂盒 新品

海金沙探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品用途

科研用途，适用于海金沙的定性及定量检测，不可用于临床诊断。

产品特点

高灵敏度：引物与探针针对海金沙高度保守区设计，灵敏度较常规PCR高100倍。

特异性强：无交叉反应，可准确区分其他微生物DNA。

便捷性：即开即用，仅需提供DNA模板。

安全对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，避免假阴性。

一管式操作：闭管检测，减少污染风险。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qPCR缓冲液 | 500μL |

| qPCR酶混合液 | 50-100μL|

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 引物-探针混合液 | 50-100μL |

| 阳性对照（1×10⁷-10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（以10倍稀释为例）

标记离心管（7-2号），每管加45μL稀释液。

依次梯度稀释阳性对照（起始浓度1×10⁸拷贝/μL），获得6个浓度标准品（10⁷-10²拷贝/μL）。

2. 样品DNA提取

建议设置N+2个样本（含阴/阳性对照），使用兼容的核酸提取试剂盒纯化DNA。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物-探针混合液 | 2 |

| 模板DNA | 5 |

4. 反应程序

预变性：94℃ 10分钟；

40循环：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集FAM通道信号）。

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35且扩增曲线典型；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

重复检测：可疑结果需复测，扩增曲线不明显者判为阴性。

废物处理：实验废弃物需按生物安全规范消毒（如10%次氯酸）。

局限性

检测结果受样本质量、提取方法及操作规范影响；

病原体变异可能导致假阴性；

试剂保存不当或配制误差可能影响灵敏度。

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