海藻探针法PCR鉴定试剂盒

海藻探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法原理：

探针设计：5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测扩增过程中荧光信号的增长，实现对靶标RNA的定量和定性检测。

三步流程：

反转录：将RNA模板逆转录为cDNA。

扩增：特异性引物与探针结合靶序列进行PCR扩增。

检测：实时采集荧光信号（FAM通道）。

产品特点

高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应。

高特异性：引物针对海藻保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及引物探针，仅需提供样品RNA。

内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于排除假阴性。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 试剂四 | 海藻探针法qRT-PCR引物混合液 | 100μL |

| 试剂五 | 海藻qRT-PCR探针 | 50μL |

| 试剂六 | 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10²~10⁷拷贝/μL梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释，独立操作避免污染。

2. RNA提取

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），推荐使用柱式RNA提取试剂盒。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| 缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| RNA模板 | 5μL | - | - |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

| 标准品 | - | - | 5μL |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30分钟

预变性：94℃ 10分钟

扩增（40循环）：94℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。

样品Ct≤35为阳性，≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

探针避光保存，避免反复冻融。

本产品严禁用于临床诊断。

公司正在出售的产品