藁本探针法PCR鉴定试剂盒

藁本探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品原理

本试剂盒采用探针法实时荧光定量PCR技术，通过特异性探针（5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团）与藁本保守序列结合。在扩增过程中，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，使报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号。通过监测荧光强度变化，实现藁本核酸的定性与定量分析。

产品组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品及样品稀释 |

| 藁本特异性引物混合液 | 100μL | 靶序列扩增 |

| 藁本特异性探针 | 50μL | 荧光信号标记 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL | 标准曲线制备及质控 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

实验步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²-10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作避免交叉污染。

2. 样本RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒（如柱式法），建议设置阴性/阳性对照。

3. PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道荧光） |

数据分析

定量分析：以标准品Ct值的log值为横轴，拷贝数log值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤35，扩增曲线呈S型；

可疑（35<Ct<40）：需复测；

阴性：Ct值≥40或无扩增曲线。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作需在无菌环境下进行，避免RNA酶污染。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

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