合欢花探针法PCR鉴定试剂盒 新品

合欢花探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

基于TaqMan探针法：

探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如BHQ1）。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增进程。

通过Ct值与标准曲线对比，实现靶序列的定性与定量分析。

产品特点

高特异性：引物及探针针对合欢花（Flos albiziae）保守序列设计，无交叉反应。

高灵敏度：检测下限可达10拷贝/μL，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

便捷性：预混PCR MasterMix（含酶、dNTPs、缓冲液），仅需加入模板和引物。

质控完善：提供阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，避免假阴性/假阳性。

试剂盒组成

| 成分 | 包装量 | 用途说明 |

| PCR MagicMix 3.0 | 1 mL（红盖） | 预混反应液（含探针） |

| 合欢花引物探针混合液 | 100 μL（白盖） | 特异性扩增靶序列 |

| 阳性对照（DNA片段） | 50 μL（黄盖） | 标准曲线制备（10^7拷贝/μL） |

| 超纯水 | 1 mL | 反应体系稀释 |

| 核酸释放剂（试用装）| 20次（1 mL） | 可选核酸提取 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（定量分析）

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^6–10^1拷贝/μL），每个浓度设3复孔。

2. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积 |

| 预混PCR MagicMix | 10 μL |

| 引物探针混合液 | 2 μL |

| 模板DNA/RNA | 2 μL |

| 超纯水 | 6 μL |

3. 扩增程序

95℃ 5 min（预变性）→ 95℃ 10 s → 60℃ 30 s（40循环，荧光采集）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑：36<Ct<40，需复检。

注意事项

操作分区进行（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

探针避光保存，反复冻融不超过3次。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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