青木香探针法PCR鉴定试剂盒

产品概述

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术，专为青木香（Radix aristolochiae）核酸的快速、高灵敏度检测设计。通过靶向青木香高度保守基因区域的特异性引物及探针，结合荧光信号实时监测，实现精准的定性与定量分析。

检测原理

探针法原理：

探针5'端标记荧光报告基团（FAM），3'端标记淬灭基团。

PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，信号强度与模板量成正比。

实时荧光定量PCR：通过循环阈值（Ct值）与标准曲线对比，计算起始模板浓度。

产品组分

| 成分 | 规格 | 功能 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 反应体系基础液 |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶及Taq酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释 |

| 青木香引物混合液 | 100 μL | 特异性扩增 |

| 青木香探针 | 50 μL | 荧光信号生成 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50 μL | 质控标准 |

| 说明书 | 1份 | 操作指南 |

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

实验步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

2. RNA提取

推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，制备样品RNA模板。

3. PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 体积 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 μL |

| 酶混合液 | 2 μL |

| 探针 | 1 μL |

| 引物混合液 | 2 μL |

| RNA模板/标准品 | 5 μL |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 1 min | 40（采集FAM信号） |

结果判读

定量分析：以Ct值绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct ≥ 40或无扩增；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

操作需分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需最后添加，防止气溶胶污染。

反复冻融不超过7次，建议分装保存。

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