肉豆蔻探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品原理

基于实时荧光定量PCR技术（探针法），通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割与靶序列结合的探针。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。扩增过程中，探针被切割后释放荧光信号，通过检测荧光强度实现靶序列的定性和定量分析。

产品特点

高灵敏度：引物与探针针对肉豆蔻高度保守区设计，检测限低至10拷贝/μL。

特异性强：不与相近物种RNA/DNA发生交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物探针，用户仅需提供RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，避免假阴性干扰。

双重检测：支持定性和定量分析，定量线性范围达10^1–10^7拷贝/μL。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/数量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL（含逆转录酶、Taq酶） |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 荧光探针 | 50μL（FAM标记） |

| 阳性对照 | 50μL（1×10^8拷贝/μL） |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记离心管（7-2号），依次加入45μL稀释液，从阳性对照（10^8拷贝/μL）起始稀释至10^2拷贝/μL。

2. RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒，建议设置阳性/阴性对照（PC/NC）。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| RNA模板 | 5 |

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区进行（试剂配制、样本处理、扩增区），避免气溶胶污染。

使用带滤芯枪头，所有离心管短暂离心后使用。

阳性对照单独存放，避免污染其他组分。

反应液避光保存，避免反复冻融。

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