红花探针法PCR鉴定试剂盒

红花探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性探针（如TaqMan探针）与目标序列结合。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，通过检测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。

产品组成

预混试剂：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺、热启动Taq酶、逆转录酶（若为RT-qPCR）。

引物与探针：针对Flos carthami高度保守区设计的特异性引物及探针（预期产物长度560 bp）。

阳性对照：无传染性靶序列片段（1×10⁸拷贝/μL）。

阴性对照：无核酸酶水。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

性能参数

特异性：与近源物种无交叉反应，引物经生物信息学验证。

灵敏度：最低检测限10~100拷贝/反应。

重复性：批内/批间变异系数（CV）<5%。

线性范围：10¹~10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）。

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每个浓度设3复孔。

2. 样本处理

提取待测样本DNA/RNA，建议使用柱式提取试剂盒。

3. PCR反应体系（20 μL）

| 成分 | 体积（μL） |

| 预混液 | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| 模板DNA/cDNA | 5 |

| 无核酸酶水 | 补足至20 |

4. 反应程序

反转录（若适用）：50℃ 30 min。

预变性：94℃ 10 min。

扩增：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号），共40循环。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。

可疑：36<Ct<40，需复测。

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：试剂配制区、样本处理区、扩增区需严格分离，避免污染。

探针避光保存，避免反复冻融。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶污染。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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