厚朴探针法PCR鉴定试剂盒

厚朴探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于探针法荧光定量PCR技术，通过5'核酸外切酶活性水解探针，释放荧光信号。探针5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物量成正比，实现实时定量检测。

产品组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | 探针法qPCR酶混合液 | 50-100μL |

| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | 厚朴特异性引物-探针混合液 | 100μL |

| 试剂五 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |

| 试剂六 | 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照（10^1-10^7拷贝/μL），独立区域操作避免污染。

标记离心管（6管），依次加入45μL稀释液及5μL上一步稀释产物，涡旋混匀。

2. 样本处理

RNA提取：推荐使用柱式病毒RNA提取试剂盒，设置阴性/阳性对照（N+2原则）。

DNA提取（若适用）：兼容常规DNA提取方法。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| 缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 模板 | 5μL（样本） | 5μL（水） | 5μL（标准品） |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准品log拷贝数为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性检测：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤39且呈典型扩增曲线。

注意事项

防污染：分区分装操作，使用带滤芯枪头。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

交叉污染或试剂保存不当影响结果准确性。

安全提示：仅供科研使用，不可用于临床诊断。

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