虎杖探针法PCR鉴定试剂盒

虎杖探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品特点

高特异性：引物基于虎杖高度保守区设计，无交叉反应。

高灵敏度：较常规PCR灵敏度提升100倍，可检测低至3个拷贝的靶基因。

即开即用：预混优化引物、酶及反应体系，仅需提供DNA模板。

质控完善：含无传染性阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，避免假阴性。

快速便捷：2-4小时内完成扩增，支持荧光定量分析（探针法）。

组成成分

核心组分：

预混PCR MasterMix（含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液）

虎杖特异性引物及探针混合液

阳性对照（冻干DNA片段）

阴性对照（无模板对照）

核酸释放剂（可选，用于粗提样本）

辅助试剂：

样品稀释液、标准品（冻干品，需临用前配制）

酶标板（96孔，部分型号含）

操作步骤

1. 样本DNA制备

纯化样本DNA（兼容多数核酸提取试剂盒），建议设置阴/阳性提取对照。

2. 标准曲线制备（定量分析适用）

将阳性对照梯度稀释（10^2-10^7拷贝/μL），独立操作避免污染。

3. qPCR反应体系（20μL/管）

按以下比例配制：

预混液10μL + 模板DNA 5μL + 超纯水补至20μL。

程序设置：

预变性：95℃ 5分钟；

循环：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟（采集荧光），40循环；

融解曲线分析：60℃-95℃（排除非特异扩增）。

结果分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判断：

阳性：Ct≤25，明显扩增曲线；

可疑：25<Ct<30，需复测确认；

阴性：Ct≥30或无Ct值。

注意事项

分区操作（样本处理、PCR配制、扩增区），避免气溶胶污染。

试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。

反复冻融不超过3次，建议分装保存。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

质量控制

阴性对照：Ct≥40或无扩增；

阳性对照：Ct≤25且扩增曲线典型；

否则实验无效，需排查原因。

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