花椒探针法PCR鉴定试剂盒 新品

花椒探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品用途

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过特异性探针与靶基因结合，实现对花椒（Pericarpium zanthoxyli）DNA的高灵敏、高特异性检测，适用于：

物种鉴定及真伪鉴别；

基因表达定量分析；

科研及质量控制。

技术原理

采用 TaqMan探针法：

引物：针对花椒保守基因序列设计，确保种属特异性。

探针：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，PCR扩增时探针水解释放荧光信号，实时监测扩增进程。

试剂盒组成

预混PCR Master Mix：含热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺缓冲液；

特异性引物对及探针；

阳性对照（标准品DNA片段）；

阴性对照（无核酸酶水）；

DNA提取试剂（可选）：适用于组织、细胞或干燥样本。

实验步骤

1. 样本制备

样本类型：新鲜组织、干燥药材、DNA提取物。

DNA提取建议：使用试剂盒配套裂解液或兼容的提取方法，避免RNA污染。

2. 标准曲线制备（定量分析）

将阳性对照梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个浓度设3复孔。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 预混Master Mix | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 无核酸酶水 | 6 |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃, 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃, 15 s | 40 |

| 退火/延伸 | 60℃, 30 s | |

注：荧光信号采集于退火/延伸阶段完成。

结果分析

定性判定：Ct值≤35为阳性，≥40为阴性，35~40需复测。

定量分析：根据标准曲线计算模板初始浓度。

注意事项

防污染：分区操作（样本准备区/PCR扩增区），使用带滤芯枪头；

引物特异性：避免引物二聚体或非特异性扩增；

样本质量：DNA需完整（A260/A280≈1.8~2.0），避免降解；

重复性建议：每个样本至少设2复孔，确保数据可靠性。

性能参数

灵敏度：最低检测限10拷贝/μL；

特异性：与近缘物种无交叉反应；

线性范围：10²~10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）。

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