化橘红探针法PCR鉴定试剂盒

化橘红探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒专用于化橘红（Exocarpium citri grandis）的探针法荧光定量PCR鉴定，基于保守序列设计特异性引物与探针，具有高灵敏度、强特异性和稳定性，适用于科研实验。

产品规格

规格：50次/盒（20 μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融，有效期1年。

运输条件：低温避光运输。

试剂盒组成

PCR反应液（含热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液等）

化橘红特异性引物与探针混合液

阳性对照（86 bp DNA片段，1×10⁸拷贝/μL）

模板稀释液

核酸释放剂（试用装，可选用于DNA提取）

使用手册

实验流程

样品DNA制备

使用兼容的DNA提取试剂盒（如柱式病毒DNAout）纯化样本DNA。

若使用本试剂盒附赠的核酸释放剂，按说明书操作裂解样本并提取DNA。

阳性对照稀释

标记离心管（7至2号），每管加入45 μL模板稀释液。

梯度稀释阳性对照（10⁷~10²拷贝/μL），每步换枪头并充分震荡，冰上保存。

qPCR反应体系配制

| 成分 | 体积（μL） |

| 2× PCR MasterMix | 10 |

| 引物探针混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| 超纯水 | 补至20 |

注意：

阴性对照以水替代模板，阳性对照最后加入以防污染。

若使用ABI 7500/7700/7900仪器，需添加ROX校正染料。

PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 1分钟 | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15秒 | 30 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 15秒 | |

数据分析

仪器采集荧光信号（激发光471 nm，发射光530 nm）。

以阳性对照Ct值绘制标准曲线，计算待测样本浓度。

注意事项

操作需在独立区域进行，避免交叉污染。

试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。

本产品仅限科研用途，不适用于临床诊断。

技术参数

检测限：≤10²拷贝/μL

特异性：仅扩增化橘红靶序列，无交叉反应。

重复性：CV值≤5%。

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