槐花探针法PCR鉴定试剂盒

槐花探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品原理

基于TaqMan探针技术，通过荧光定量PCR（qPCR）检测槐花特异性基因片段。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，扩增时Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号，实时监测扩增曲线，实现定性与定量分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 用途说明 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| qPCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶、Taq DNA聚合酶等 |

| 槐花特异性引物混合液 | 100 μL | 靶向槐花保守基因区域 |

| TaqMan探针 | 50 μL | 标记荧光基团的特异性探针 |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL | 验证实验有效性 |

| 模板稀释液 | 1 mL | 标准曲线制备及样品稀释 |

实验步骤

标准曲线制备（10^2~10^7拷贝/μL梯度稀释阳性对照）。

样本处理：

提取待测样本DNA（推荐柱式提取法）。

阴性对照（超纯水）与阳性对照同步处理。

反应体系配制（20 μL/反应）：

qPCR缓冲液 10 μL

酶混合液 2 μL

引物混合液 2 μL

探针 1 μL

模板DNA 5 μL

qPCR程序：

逆转录：50℃ 30 min（可选，若检测RNA需反转录）。

预变性：94℃ 10 min。

扩增：40循环（94℃ 15 sec → 60℃ 1 min，采集FAM信号）。

结果判读

定量分析：以Ct值为纵轴、标准品log拷贝数为横轴绘制标准曲线，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。

阴性：Ct≥40或无扩增。

灰区（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

严格分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。

阳性对照与样本需分开存放，防止交叉污染。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

反复冻融≤7次，避免试剂失效。

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