槐角探针法PCR鉴定试剂盒

槐角探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

探针设计：针对槐角基因保守区域设计特异性引物及探针，5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。

信号释放：PCR扩增时，Taq酶切割探针，分离报告基团与淬灭基团，荧光信号随产物累积等比增强，通过仪器实时检测实现定性与定量分析。

试剂盒组成

| 成分 | 规格（示例） | 功能说明 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL | 提供反应基础环境 |

| 酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶及Taq聚合酶 |

| 槐角特异性引物/探针 | 100μL引物+50μL探针 | 靶向扩增槐角核酸序列 |

| 阳性对照 | 1×10^8拷贝/μL（非传染性DNA）| 标准曲线制备与质控 |

| 阴性对照 | 无核酸酶水 | 排除污染及假阳性 |

操作流程

1. 标准曲线制备（10^1~10^6拷贝/μL梯度稀释）

使用阳性对照按10倍梯度稀释，独立区域操作避免交叉污染。

2. 样本处理

核酸提取：推荐使用柱式病毒RNA/DNA提取试剂盒，提取后-20℃暂存。

质控设置：每批次需包含阳性对照（PC）和阴性对照（NC）。

3. PCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积 |

| 缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 探针 | 1μL |

| 引物混合液 | 2μL |

| 模板RNA/DNA | 5μL |

4. 扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 否 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 否 |

| 扩增（40循环）| 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min | 是（FAM通道） |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型指数增长。

阴性：Ct≥40或无扩增曲线。

灰区（35<Ct<40）：需重复检测确认。

注意事项

分区操作：核酸提取、试剂配制、扩增需在独立区域进行，防止污染。

质控要求：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。

临床限制：仅限科研使用，不可用于临床诊断。

样本保存：长期存储需-70℃，运输需2~8℃冰袋。

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