黄柏探针法PCR鉴定试剂盒

黄柏探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

预期用途

适用于黄柏（Phellodendron chinense）核酸的定性或定量检测，用于科研领域（如物种鉴定、成分分析），不适用于临床诊断或治疗。

检验原理

基于TaqMan探针法实时荧光定量PCR技术：

特异性引物和探针靶向黄柏DNA保守序列。

PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号（FAM通道检测）。

通过荧光强度实时监测，实现核酸定性与定量分析。

试剂组成

| 组分 | 规格 | 备注 |

| 扩增反应液 | 19.5μL/管（主混合液） | 含dNTPs、酶、缓冲液 |

| 引物-探针混合液 | 0.5μL/管 | 特异性引物及TaqMan探针 |

| 阳性质控品 | 50μL（1×10^7拷贝/μL） | 人工合成DNA片段 |

| 阴性质控品 | 50μL | 无核酸酶水 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 用于标准曲线制备 |

注：不同品牌组分略有差异，需按实际货号核对。

适用仪器

荧光定量PCR仪：ABI系列、Bio-Rad CFX、LightCycler、MX3000P等。

自备耗材：无核酸酶离心管（0.2mL/1.5mL）、滤芯吸头、离心机、移液器等。

样本要求

样本类型：植物组织、提取的DNA（纯度A260/A280≈1.8-2.0）。

保存与运输：短期-20℃，长期-70℃；避免反复冻融，冰袋运输（2-8℃）。

操作步骤

DNA提取：推荐使用商品化提取试剂盒（如Hypure病毒基因组DNA提取试剂盒）。

试剂配制：

解冻后涡旋混匀，离心分装（每反应管20μL体系：19.5μL反应液 + 0.5μL引物-探针混合液）。

加入5μL模板DNA（样本/阴阳对照）。

PCR扩增：

程序设置：

预变性：95℃ 3分钟；

40循环：95℃ 15秒 → 55-60℃ 30秒（采集荧光信号）。

结果分析：

阳性判定：Ct值≤35；

定量分析：通过标准曲线（10^1-10^6拷贝/μL梯度稀释）计算模板浓度。

注意事项

分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免交叉污染。

不同批号试剂不可混用，阴性对照需无扩增曲线。

若用于定量，需每次实验建立标准曲线。

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