三七探针法PCR鉴定试剂盒

产品基本信息

包装规格：50次/盒（20 μL体系）

用途：科研实验（定性/定量检测三七特异性DNA片段）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

运输条件：低温运输（冰袋或干冰）

试剂盒组成

PCR反应预混液：含荧光探针、引物、dNTPs、Taq酶等。

阳性对照：86 bp DNA片段（无传染性，浓度1×10^8拷贝/μL）。

模板稀释液：用于标准曲线制备。

阴性对照：无核酸酶水。

可选附件：DNA提取试用装。

实验操作流程

1. 样品DNA制备

使用自选方法或配套DNA提取试剂盒纯化样品DNA。

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC）以监控提取过程。

2. 标准曲线制备（定量检测需进行）

标记6支离心管（编号6至1），每管加入45 μL模板稀释液。

梯度稀释阳性对照：

6号管：5 μL原液（1×10^8拷贝/μL）→ 1×10^7拷贝/μL。

依次稀释至1号管（1×10^2拷贝/μL），每次更换枪头。

稀释后的标准品置于冰上备用。

3. qPCR反应体系（20 μL/管）

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR预混液 | 10 |

| 模板DNA/标准品 | 5 |

| 无核酸酶水 | 5 |

注意：

阴性对照以水替代模板。

阳性对照最后添加，避免污染。

不同仪器需调整ROX参比染料（如ABI 7500需添加，LightCycler480无需）。

4. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 1 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 30 |

| 退火/延伸 | 60℃ | 15 sec | |

5. 数据采集与分析

荧光通道：激发光471 nm，发射光530 nm（FAM探针）。

定量分析：以Ct值为纵轴，阳性对照log浓度为横轴绘制标准曲线，计算样品浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤36，扩增曲线呈S型。

阴性：Ct≥40或无Ct值。

可疑：36<Ct<40，需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

仪器兼容性：适用于主流qPCR仪（ABI系列、Bio-Rad、Roche等）。

废弃物处理：实验后使用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面。

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