桑寄生探针法PCR鉴定试剂盒

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，采用探针法检测桑寄生特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团。当Taq酶在扩增过程中切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对桑寄生高度保守区设计，避免与其他微生物交叉反应。

即开即用：仅需提供样品RNA模板，无需额外优化反应体系。

内置对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），便于区分假阴性结果。

适用范围：仅限科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL |

| 桑寄生引物混合液 | 100μL |

| 桑寄生qRT-PCR探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。

2. RNA提取

建议使用柱式病毒RNA提取试剂盒，制备样品RNA时需设置阳性对照（PC）和阴性对照（NC）。

3. qRT-PCR反应

反应体系（20μL）：

缓冲液10μL + 酶混合液2μL + 探针1μL + 引物混合液2μL + 模板RNA 5μL。

反应程序：

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型；

阴性：Ct≥40；

可疑结果（35<Ct<40）需重复检测。

注意事项

操作需在无菌环境下进行，避免交叉污染。

试剂解冻后需充分混匀，短暂离心后使用。

阳性对照需单独存放，防止污染其他组分。

声明：本产品仅限科研使用，严禁用于临床或其他非科研用途。

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