山药探针法PCR鉴定试剂盒 新品

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术，通过探针法实现高特异性检测：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（FAM），3'端标记淬灭基团，靶序列扩增时Taq酶切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过荧光强度增长与Ct值，计算起始模板浓度。

反转录步骤（若含RT）：将RNA逆转录为cDNA后进行扩增。

产品组成

| 成分 | 规格/功能 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL（提供反应体系基础环境） |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL（含Taq酶、逆转录酶等） |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL（用于标准曲线稀释） |

| 引物混合液 | 100μL（山药特异性引物） |

| qRT-PCR探针 | 50μL（标记FAM荧光） |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（无传染性DNA片段） |

| 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备（6个10倍梯度稀释，10²~10⁷拷贝/μL）：

使用专用稀释液分步稀释阳性对照，独立操作避免污染。

2. 样本RNA提取：

推荐配套RNA提取试剂盒，或兼容的其他品牌试剂。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）：

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 反应程序：

逆转录：50℃ 30 min（若含RT步骤）；

预变性：94℃ 10 min；

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，典型扩增曲线；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区进行，避免交叉污染。

阳性对照需最后加入，防止气溶胶扩散。

仅限科研使用，不可用于临床诊断。

避免反复冻融试剂，影响稳定性。

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