黄精探针法PCR鉴定试剂盒

黄精探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

产品原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测黄精特异性核酸序列。探针5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当Taq酶在扩增过程中切割探针时，报告基团与淬灭基团分离，释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶序列的定性与定量分析。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对黄精保守序列设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶及反应组分，仅需提供RNA模板。

内控设计：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），可区分假阴性结果。

适用范围：科研用途，不可用于临床诊断。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 功能说明 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL | 提供反应体系基础环境 |

| qRT-PCR酶混合液 | 100 μL | 含逆转录酶及Taq DNA聚合酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 标准品稀释及阴性对照制备 |

| 引物混合液 | 100 μL | 黄精特异性引物 |

| qRT-PCR探针 | 50 μL | 荧光标记探针 |

| 阳性对照 | 50 μL (10⁸拷贝/μL) | 标准曲线建立及质控 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10²-10⁷拷贝/μL）

标记6管，依次10倍稀释阳性对照（45 μL稀释液 + 5 μL上一浓度），冰上保存。

2. RNA提取

建议设置阴性（水）和阳性对照（试剂盒阳性对照稀释液）。

使用兼容的RNA提取试剂盒或柱式法纯化样本RNA。

3. qRT-PCR反应（20 μL体系）

反应体系：

10 μL缓冲液 + 2 μL酶混合液 + 1 μL探针 + 2 μL引物混合液 + 5 μL模板RNA。

反应程序：

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，扩增曲线明显；

阴性：Ct ≥ 40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

探针避光保存，避免反复冻融。

阳性对照单独存放，防止污染其他组分。

实验后使用10%次氯酸或75%乙醇清洁工作台。

声明：本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断或其他用途。

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