蒺藜探针法PCR鉴定试剂盒

蒺藜探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

技术原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性探针法检测。探针5'端标记荧光报告基团，3'端标记淬灭基团，通过Taq酶5'→3'外切酶活性切割探针释放荧光信号，实现靶序列的定量与定性分析。

产品特点

高特异性：针对蒺藜保守序列设计引物及探针，无交叉反应。

高灵敏度：检测下限达10~100拷贝/μL。

操作简便：预混缓冲液与酶体系，减少操作步骤。

内控完善：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL），便于结果验证。

防污染设计：试剂经磷酸化处理，避免非特异性扩增。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500 μL |

| 探针法qRT-PCR酶混合液 | 100 μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 蒺藜引物混合液 | 100 μL |

| 蒺藜qPCR探针 | 50 μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50 μL |

实验步骤

标准曲线制备：将阳性对照10倍梯度稀释（10^2~10^7拷贝/μL）。

RNA提取：自备样本RNA，建议设置阴性/阳性对照。

反应体系配制（20 μL/管）：

缓冲液10 μL + 酶混合液2 μL + 探针1 μL + 引物混合液2 μL + 模板RNA 5 μL。

PCR程序：

逆转录：50℃ 30 min → 预变性：94℃ 10 min → 40循环（94℃ 15 sec，60℃ 1 min，采集FAM通道信号）。

数据分析

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

Ct≤35为阳性；Ct≥40为阴性；35<Ct<40需复测。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

阳性对照需最后加入，单独存放。

本产品仅限科研使用，不可用于临床诊断。

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