鸡血藤探针法PCR鉴定试剂盒

鸡血藤探针法PCR鉴定试剂盒

商品属性

检测原理

基于实时荧光定量PCR技术，采用TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，探针与靶序列结合后，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光强度随扩增循环数的增长（Ct值），实现对目标RNA/DNA的定量和定性检测。

产品特点

高灵敏度与特异性：引物及探针针对鸡血藤高度保守区域设计，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物探针，用户仅需提供样品RNA模板。

内置对照：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，便于结果判读。

双重应用：支持定性和定量检测，线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液（含逆转录酶） | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 鸡血藤引物混合液 | 100μL |

| TaqMan探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |

| 使用说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备（以10倍梯度稀释为例）：

标记6管，依次稀释阳性对照至10^6–10^1拷贝/μL，独立操作避免污染。

2. 样品RNA提取：

建议设置阴性对照（NC）和阳性对照（PC），推荐使用柱式RNA提取试剂。

3. qRT-PCR反应体系（20μL）：

| 组分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板RNA/标准品/对照 | 5 |

4. 反应程序：

逆转录：50℃ 30分钟 → 预变性：94℃ 10分钟 → 40循环（94℃ 15秒，60℃ 1分钟，采集FAM信号）。

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤36，典型S型扩增曲线；

阴性：Ct≥40或无信号；

可疑（36<Ct<40）：需复检确认。

注意事项

实验分区操作，避免气溶胶污染。

试剂解冻后需混匀，短暂离心后使用。

探针避光保存，反复冻融不超过3次。

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