山楂探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品基本信息

规格：50次/盒（20μL反应体系）

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月

适用范围：科研用途（非临床），用于山楂（Fructus crataegi）的DNA定性或定量检测。

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团（如NFQ）。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

实时检测：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶序列的定量分析，线性范围达5个数量级（10^2–10^7拷贝/μL）。

试剂盒组成

| 编号 | 成分 | 规格 |

| 试剂一 | qPCR缓冲液 | 500μL |

| 试剂二 | qPCR酶混合液（含逆转录酶） | 50–100μL |

| 试剂三 | 荧光PCR模板稀释液 | 1mL |

| 试剂四 | 山楂特异性引物-探针混合液 | 100μL |

| 试剂五 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |

| 试剂六 | 说明书 | 1份 |

实验步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10^7–10^2拷贝/μL），每个梯度需更换枪头，避免交叉污染。

2. 样本处理

DNA提取：推荐使用柱式提取法，设置阴性对照（NC，超纯水）和阳性对照（PC，稀释阳性模板）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 体积 |

| qPCR缓冲液 | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL |

| 引物-探针混合液 | 2μL |

| 模板DNA/标准品/对照 | 5μL |

| 超纯水 | 补至20μL |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 10–30 min|

| 预变性 | 94–95℃ | 10 min |

| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35（或39），扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40，或无扩增。

灰区（35–40）：需复测确认。

注意事项

防污染：分设试剂配制区、样本处理区、扩增区，使用带滤芯枪头。

质量控制：

阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤30。

避免反复冻融试剂或样本。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；交叉污染可能导致假阳性。

仅限科研使用，结果需结合其他方法验证。

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