蛇床子探针法PCR鉴定试剂盒 新品

技术原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用探针法检测蛇床子特异性核酸序列：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）与标准曲线比对，实现靶序列的定性和定量检测。

产品组成

| 成分 | 规格/含量 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| qRT-PCR酶混合液 | 100μL |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |

| 蛇床子引物混合液 | 100μL |

| 蛇床子探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

注：需自备样品RNA模板及超纯水。

操作步骤

1. 标准曲线制备（6个梯度稀释）

使用阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）按10倍梯度稀释至10²~10⁷拷贝/μL，独立区域操作避免污染。

2. 样品RNA提取

推荐使用兼容的RNA提取试剂盒，设置阳性（PC）和阴性对照（NC）。

3. qRT-PCR反应体系（20μL/管）

| 成分 | 体积（μL） |

| qRT-PCR缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 样品RNA/标准品/对照 | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| 扩增（40循环）| 94℃ | 15 sec |

| | 60℃ | 1 min（采集荧光） |

数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct≤35或≤36，典型扩增曲线。

阴性：Ct≥40或无扩增。

灰区（35~40）：需复测确认。

注意事项

操作需分区（试剂准备、样品处理、扩增区），避免交叉污染。

探针避光保存，反复冻融≤3次。

阳性对照需最后加入，防止污染。

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