麝香探针法PCR鉴定试剂盒

检测原理

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用TaqMan探针法：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。当探针完整时，荧光信号被淬灭；PCR扩增时，Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放报告基团荧光信号。

定量分析：通过监测荧光信号增长（Ct值）实现靶标核酸的定性与定量检测，灵敏度可达几百拷贝/反应。

产品组分

| 组分名称 | 规格/数量 |

| 探针法qRT-PCR缓冲液 | 500μL ×1管 |

| 酶混合液 | 100μL ×1管 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL ×1管 |

| 引物混合液 | 100μL ×1管 |

| 荧光探针 | 50μL ×1管 |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL）| 50μL ×1管 |

| 阴性对照 | 50μL ×1管 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

将阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），用于建立定量标准曲线。

2. 样本RNA提取

使用兼容的RNA提取试剂盒纯化样本RNA，建议设置阳性/阴性提取对照。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| qRT-PCR缓冲液 | 10μL | 10μL | 10μL |

| 酶混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |

| 荧光探针 | 1μL | 1μL | 1μL |

| 样本RNA/标准品 | 5μL | - | 5μL |

| 超纯水 | - | 5μL | - |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 |

| 逆转录 | 50℃ | 30 min |

| 预变性 | 94℃ | 10 min |

| PCR扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（40循环，采集FAM信号） |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈典型S型。

阴性：Ct≥40或无扩增。

可疑（35<Ct<40）：需重复检测。

注意事项

储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融。

污染控制：分区操作（样本制备区、PCR扩增区），使用带滤芯枪头。

适用范围：仅限科研，不可用于临床诊断或动物检疫。

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