柿蒂探针法PCR鉴定试剂盒 新品

检测原理

基于实时荧光定量PCR（qPCR）探针法技术：

探针设计：5'端标记荧光报告基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。Taq酶在扩增时切割探针，释放荧光信号，信号强度与靶序列含量成正比。

定量分析：通过标准曲线（10¹–10⁷拷贝/μL）计算待测样本中柿蒂特异性RNA/DNA的浓度。

产品特点

高灵敏度：优化引物与探针，检测限低至10拷贝/μL。

特异性强：靶向柿蒂保守序列，避免交叉反应。

即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，仅需提供模板RNA/DNA。

质量控制：含阳性对照（无传染性DNA片段）和阴性对照，区分假阴性。

应用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 |

| qRT-PCR缓冲液 | 500μL |

| 酶混合液 | 100μL |

| 模板稀释液 | 1mL |

| 引物混合液 | 100μL |

| 荧光探针 | 50μL |

| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |

| 说明书 | 1份 |

操作步骤

1. 标准曲线制备

梯度稀释阳性对照（10倍稀释，6个浓度点），独立操作避免污染。

2. 样本制备

提取待测RNA/DNA，建议设置阳性（PC）和阴性对照（NC）。

3. qPCR反应体系（20μL）

| 组分 | 体积（μL） |

| 缓冲液 | 10 |

| 酶混合液 | 2 |

| 引物混合液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 模板RNA/DNA | 5 |

4. 反应程序

逆转录：50℃ 30 min（若含RNA）；

预变性：94℃ 10 min；

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光）。

结果判读

定量分析：根据标准曲线计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct值≤36，典型S型扩增曲线；

阴性：Ct值≥40或无信号；

可疑（36<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

操作分区（样本制备、扩增、产物分析），避免交叉污染。

使用带滤芯枪头，试剂解冻后需混匀并短暂离心。

废弃产物需按生物危害物处理。

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